Elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。計(jì)算方法是以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
Elisa試劑盒在沒有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用純凈水配制溶液，切勿使用自來(lái)水。
1.樣品稀釋：酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽(yáng)性。因此，國(guó)外檢測(cè)血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來(lái)。樣品稀釋倍數(shù)均通過(guò)大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴(yán)格按使用說(shuō)明書操作，如產(chǎn)品應(yīng)取10u1樣品進(jìn)行稀釋，個(gè)別用戶取5u1甚至1u1樣品進(jìn)行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問題。
2.試劑盒平衡：試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫(約25℃)，一般需在室溫放置20~30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠，樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒打開盒蓋置37℃溫箱20分鐘。稀釋前、后的樣品需要充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。
3.加樣：盡量操作規(guī)范，將液體垂直懸空快速加入到微孔板中，避免加到孔避上。加完試劑后用手適當(dāng)振蕩或在桌面適當(dāng)作圓周運(yùn)動(dòng)，使孔內(nèi)試劑充分混勻，蓋好蓋板膜。
4.洗板：洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置10-15s，甩去板孔中洗液后，一定要用力拍干；及時(shí)更換吸水紙，尤其是拍過(guò)酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。
上海酶聯(lián)生物科技有限公司專業(yè)經(jīng)營(yíng)生物科學(xué)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)儀器、研究試劑和實(shí)驗(yàn)室耗材，致力于向國(guó)內(nèi)外生物科學(xué)研究人員提供服務(wù)。專業(yè)生產(chǎn)廠家具有先進(jìn)水平的產(chǎn)品推薦給各類研究人員；另一方面也非常重視自主產(chǎn)品研究和開發(fā)，推出了一系列具有競(jìng)爭(zhēng)力的產(chǎn)品和服務(wù)。同時(shí)國(guó)家對(duì)于生物行業(yè)的發(fā)展給予了極大的重視，更多地側(cè)重于的投入。
以上是Elisa試劑盒樣品進(jìn)行如何正確稀釋你知道嗎？
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